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霍亂化學檢驗方法介紹

　　(一)血液檢查

　　紅細胞和血紅蛋白增高，白細胞計數(shù)10～20×109/L(1萬～2萬/mm3)或更高，中性粒細胞及大單核細胞增多。血清鉀、鈉、氯化物和碳酸鹽降低，血pH下降，尿素氮增加。治療前由于細胞內(nèi)鉀離子外移，血清鉀可在正常范圍內(nèi)，當酸中毒糾正后，鉀離子移入細胞內(nèi)而出現(xiàn)低鉀血癥。

　　(二)尿檢查

　　少數(shù)病人尿中可有蛋白、紅白細胞及管型。

　　(三)病原菌檢查

　　1.常規(guī)鏡檢

　　可見粘液和少許紅、白細胞。

　　2.涂片染色

　　取糞便或早期培養(yǎng)物涂片作革蘭染色鏡檢，可見革蘭陰性稍彎曲的弧菌。

　　3.懸滴檢查

　　將新鮮糞便作懸滴或暗視野顯微鏡檢，可見運動活潑呈穿梭狀的弧菌。

　　4.制動試驗

　　取急性期病人的水樣糞便或堿性胨水增菌培養(yǎng)6小時左右的表層生長物，先作暗視野顯微鏡檢，觀察動力。如有穿梭樣運動物時，則加入01群多價血清一滴，若是群霍亂弧菌，由于抗原抗體作用，則凝集成塊，弧菌運動即停止。如加01群血清后，不能制止運動，應(yīng)再用0139血清重作試驗。

　　5.增菌培養(yǎng)

　　所有懷疑霍亂患者糞便，除作顯微鏡檢外，均應(yīng)作增菌培養(yǎng)。糞便留取應(yīng)在使用抗菌藥物之前，且應(yīng)盡快送到實驗室作培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基一般用pH8.4的堿性蛋白胨水，36～37℃培養(yǎng)6～8小時后表面能形成菌膜。此時應(yīng)進一步作分離培養(yǎng)，并進行動力觀察和制動試驗，這將有助于提高檢出率和早期診斷。

　　6.分離培養(yǎng)

　　常用慶大霉素瓊脂平皿或堿性瓊脂平板。前者為強選擇性培養(yǎng)基，36～37℃培養(yǎng)8～10小時霍亂弧菌即可長成小菌落。后者則需培養(yǎng)10～20小時。選擇可疑或典型菌落，應(yīng)用霍亂弧菌“0”抗原的抗血清作玻片凝集試驗，若陽性即可出報告。近年來國外亦有應(yīng)用霍亂毒素基因的DNA探針，作菌落雜交，可迅速鑒定出產(chǎn)毒01群霍亂弧菌。

　　7.PCR檢測

　　新近國外應(yīng)用PCR技術(shù)來快速診斷霍亂。其中通過識別PCR產(chǎn)物中的霍亂弧菌毒素基因亞單位CtxA和毒素協(xié)同菌毛基因(TcpA)來區(qū)別霍亂菌株和非霍亂弧菌。然后根據(jù)TcpA基因的不同DNA序列來區(qū)別古典生物型和埃爾托生物型霍亂弧菌。4小時內(nèi)可獲結(jié)果，據(jù)稱能檢出每ml堿性蛋白胨水中10條以下霍亂弧菌。

　　8.鑒別試驗

　　古典生物型、埃爾托生物型和0139型霍亂弧菌的鑒別。

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