★二、紫外-可見分光光度計
(一)基本結構:
光源 紫外:氘燈或氫燈;可見: 鎢燈或鹵鎢燈
單色器 色散元件(光柵或棱鏡);狹縫
吸收池 紫外: 石英; 可見: 玻璃, 石英
檢測器 光電池、光電管、光電倍增管、光二極管陣列檢測器
數(shù)據記錄和處理
(二)儀器的校正和檢定
(1) 波長的校正 汞燈或氘燈的特定譜線為參照或鈥玻璃的特定波長
(2)吸光度的準確度檢定 用重鉻酸鉀的硫酸溶液
(3)雜散光的檢查 一般來源于光學儀器表面的瑕疵
三、 吸光度的測定要求
1. 溶劑 應符合規(guī)定
2. 作空白試驗校正 目的:消除溶劑和吸收池的影響
3. 測定波長的檢查 一般以吸光度最大的波長 max為測定波長,吸收峰的波長應在該品種規(guī)定波長的±2%以內,否則應考慮供試品的真?zhèn)、純度及儀器波長正確性。
影響波長檢查結果的條件有:供試品的真?zhèn)闻c純度、溶劑的種類 、儀器波長的正確性
4. 供試品溶液濃度 使吸光度在0.3-0.7范圍內
5. 儀器狹縫寬度的選擇 調至供試品溶液的吸光度不再增加為止
♣♣四、應用
(一)鑒別 《中國藥典》所采用方法:
1. 核對吸收光譜的特征參數(shù):最大吸收波長lmax,吸收系數(shù)E1%1cm;吸光度 A
2. 比較吸光度比值: Al1 /Al2®El1/El2
3. 比較吸收光譜的一致性
(二)雜質檢查:
依據:藥物與雜質的結構不同,故吸收光譜也不同。
1. 藥物在紫外可見光區(qū)沒有明顯吸收,所含雜質有較強吸收¾¾少量雜質可用光譜檢索出來。
2. 藥物有較強吸收;雜質無吸收或很弱¾E(e)¯ 或雜質有更強吸收¾¾ E(e)
規(guī)定吸光度的上下限可在一定程度上控制雜質的量
(三)含量測定:
紫外分光光度法用于含量測定的方法有三種:前三種方法
(1)對照品比較法:
AR/AX=ECRL / ECXL =CR/ CX Þ CX=(AX/AR)CR
供試品溶液與對照品溶液濃度C及測定條件應一致,E、L相等
(2)吸收系數(shù)法(絕對法):
♣♣♣♣ A=E1%1cm CL ÞC=A/(E1%1cmL)
對儀器須進行嚴格的校正和檢定(波長的準確度、狹縫寬度符合要求),否則影響準確度
(3)計算分光光度法 如雙波長分光光度法、導數(shù)光普法
主要用于消除樣品中干擾組分的干擾
(4)比色法(屬于可見分光光度法) 顯色劑顯色后測定
§2. 熒光分析法
一、基本原理
(一)熒光的產生:某些物質受紫外光或可見光照射激發(fā)后,能發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的熒光;除去激發(fā)光源,熒光立即熄滅。
熒光的能量小于激發(fā)光的能量,波長則長于激發(fā)光。
(二)熒光光譜
熒光激發(fā)光譜¾¾熒光的激發(fā)光波長為橫坐標;發(fā)射光強度為縱坐標
熒光發(fā)射光譜¾¾激發(fā)光波長和強度不變,熒光物質的不同熒光波長為橫坐標;發(fā)射光強度為縱坐標
激發(fā)光波長、強度不變,測定用溶劑、溫度等條件一定時,熒光強度與物質濃度成正比——定量依據。
相關推薦:2010執(zhí)業(yè)藥師藥事管理與法規(guī)模擬題及答案匯總