2014檢驗(yàn)技師檢驗(yàn)基礎(chǔ)講解：抗核抗體檢測(cè)方法

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　　ANA的檢測(cè)方法

　　由于ANA的復(fù)雜性及多樣性，故測(cè)定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴(kuò)散、對(duì)流免疫電泳及免疫印跡技術(shù)等。

　　1.免疫熒光法檢測(cè)血清總ANA最常用的方法是熒光免疫組化法。多用小鼠肝切片或印片作為細(xì)胞核基質(zhì)，結(jié)果比較穩(wěn)定可靠，在熒光顯微鏡下見到的細(xì)胞核有熒光著色為陽性反應(yīng)。如將患者血清先進(jìn)行不同比例的稀釋，可以做大致的定量試驗(yàn)，在1：80稀釋仍然雖陽性時(shí)，對(duì)SLE的診斷有較大的參考價(jià)值。在油鏡下觀察結(jié)果，可以將ANA陽性的熒光現(xiàn)象分成4種主要的熒光核型，核型的確定對(duì)臨床診斷有進(jìn)一步的參考價(jià)值。①周邊型表示抗DNA抗體存在;②均質(zhì)型表示有抗DNP抗體;③斑點(diǎn)(顆粒)型多為抗ENA抗體;④核仁型多為抗核小體抗體。SLE患者常出現(xiàn)周邊型、勻質(zhì)型或混合型，斑點(diǎn)型多見于混合結(jié)締組織病，而硬皮病多為核仁型;周邊型對(duì)SLE有較高的特異性。

　　近年有人用錐蟲或血鞭毛蟲(例如綠蠅短膜蟲試驗(yàn))作基質(zhì)測(cè)定抗dsDNA抗體，因?yàn)檫@些血寄生蟲的動(dòng)基體內(nèi)含大量的純dsNDA，無其他抗原干擾;在陽性結(jié)果時(shí)，可見鞭毛一端的動(dòng)基體顯示清晰的熒光。因此該試驗(yàn)用于測(cè)定抗dsDNA抗體具有特異性強(qiáng)和敏感性高的優(yōu)點(diǎn)。另外，短膜蟲對(duì)人畜無害，可以人工養(yǎng)殖，來源方便，值得推廣。

　　2.放射免疫法常用檢測(cè)抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。①Farr法的原理為用同位素標(biāo)記DNA，被標(biāo)記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結(jié)合，經(jīng)50%硫酸銨飽和液沉淀，然后比較沉淀物和上清液中的放射活性，從而得出DNA結(jié)合活性，一般結(jié)合率大于20%為陽性。②過濾法是在分離結(jié)合物時(shí)用纖維素酯薄膜濾器(孔徑為0.45μm)進(jìn)行過濾，游離的DNA被濾去而與抗體結(jié)合的復(fù)合物被阻留在濾膜上。

　　3.ELISA臨床上主要是應(yīng)用間接ELISA檢測(cè)抗dsDNA抗體，其重復(fù)性及敏感性均較對(duì)流免疫電泳及雙擴(kuò)散為高。目前已有試劑盒供應(yīng)。

　　4.免疫印跡(immunoblotting)先將混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區(qū)帶，然后將這些帶轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，最后用酸標(biāo)抗體或放射性同位素標(biāo)記抗體進(jìn)行檢測(cè)和分析(方法見第十五章)。由于該試驗(yàn)不需純化的單個(gè)抗原，可在同一固相上作多項(xiàng)分析檢測(cè)，靈敏度高，特異性強(qiáng)。故目前已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測(cè)，如檢測(cè)抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。

　　另外，還可用傳統(tǒng)的瓊脂雙向擴(kuò)散法、對(duì)流免疫電泳法、間接血凝法和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。這些試驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)條件比較低，但敏感性也比較低。

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