文章責編:陶玉良
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執(zhí)業(yè)藥師藥物分析知識點:雜質的去除
酶提取液中常含有雜蛋白、多糖、脂類及核酸等雜質,可用下述方法去除:
調PH和加熱法:利用蛋白質對酸、堿和熱變性方面性質的差異,可去除非活性雜蛋白。如制備脂肪酶時,在pH3、4時以400C溫度加熱150 min,淀粉酶活力可喪失90%而被除去,而脂肪酶活力仍保持80%以上。
蛋白質表面變性法:蛋白質表面變性后其性質有所不同,借以去除雜蛋白。如制備過氧化氫酶時,加入氯仿和乙醇進行振蕩可以將雜蛋白變性而去除。
蛋白質沉淀劑法:利用醋酸鋁、利凡諾、單寧酸、離子型表 面活性劑等蛋白質沉淀劑可以去除雜蛋白及粘多糖類雜質。使用時要注意這類試劑常可引起酶變性失活,因此應迅速除去。
選擇性變性法:各種蛋白質對變性劑的穩(wěn)定性不同,可以用選擇性變性劑去除雜蛋白。如細胞色素丙對三氯醋酸較穩(wěn)定,所以在制備時可用2.5%三氯醋酸使其他雜蛋白變性使沉淀除去。
加保護劑熱變性法:酶與底物或競爭性抑制劑結合后,其穩(wěn)定性常顯著增加。所以常用它們?yōu)楸Wo劑,再用一些劇烈手段破壞雜蛋白,如用D-甲基苯甲酸為D-氨基酸氧化酶的保護劑,經加熱除去雜蛋白,使該酶得到很好的提純。
核酸沉淀劑法:酶液中的核酸類雜質,可以用氯化錳、魚精蛋白硫酸鹽等沉淀劑使其沉淀而除去。必要時,也可用核糖核酶將核酸降解后除去。