2014執(zhí)業(yè)藥師《藥物分析》章節(jié)復(fù)習(xí):第六章

　　第三節(jié) 高效液相色譜法

　　一、基本原理

　　1.基本概念

　　色譜峰參數(shù)：峰高或峰面積(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰寬(用于衡量柱效)

　　保留值：保留時間、死時間、調(diào)整保留時間

　　峰寬：標(biāo)準(zhǔn)差、半峰寬、峰寬

　　2.塔板理論：把組分在兩相間的連續(xù)轉(zhuǎn)移過程，分解為間歇的在單個塔板中的分配平衡過程

　　理論塔板數(shù) n=5.54(tR/Wh/2)2

　　色譜柱的理論塔板數(shù)越多，柱效越高;同樣長度中塔板高度越小，柱效越高。

　　3.速率理論：主要說明使色譜峰擴(kuò)張而降低柱效的因素

　　范氏方程 H=A+B/μ+Cμ

　　A為渦流擴(kuò)散項。采用適當(dāng)粒度、均勻的填料并填充均勻可減小渦流擴(kuò)散

　　B為縱向擴(kuò)散系數(shù)。流動相為液體，柱溫為室溫，B/μ可忽略不計

　　C為傳質(zhì)阻抗系數(shù)。在能完全覆蓋載體表面的前提下，應(yīng)適當(dāng)減少固定液用量。

　　二、高效液相色譜儀

　　1.高壓輸液泵

　　2.色譜柱：分析型和制備型

　　3.進(jìn)樣閥

　　4.檢測器

　　(1)選擇性檢測器：與待測物濃度、結(jié)構(gòu)有關(guān)

　　①紫外檢測器：靈敏度、重復(fù)性及線性范圍較好，適用于具有共軛結(jié)構(gòu)的化合物的檢測

　�、诠舛�極管陣列檢測器：檢測原理相同，可同時記錄待測物吸收光譜，用于光譜鑒定和純度檢查

　　③熒光檢測器：靈敏，用于在流動相條件下具有熒光或經(jīng)衍生轉(zhuǎn)化為具有熒光的化合物的檢測

　�、茈娀瘜W(xué)檢測器：靈敏度高，僅用于在流動相條件下發(fā)生氧化-還原反應(yīng)的化合物

　�、葙|(zhì)譜檢測器：高靈敏度、高選擇性、分析范圍廣;不適用于小分子化合物，主要用于大分子物質(zhì)如蛋白質(zhì)、多肽的檢測

　　(2)通用性檢測器：質(zhì)量型檢測器

　�、偈静钫酃鈾z測器：僅對少數(shù)物質(zhì)如糖類靈敏度較高，受環(huán)境溫度影響大，實際應(yīng)用少

　　②蒸發(fā)光散射檢測器：適用于UV檢測困難的物質(zhì)的分析，響應(yīng)值與濃度通常不呈線性關(guān)系。

　　三、吸附色譜法

　　1.原理：被分離組分與流動相對吸附劑吸附能力的差異

　　2.常用固定相和流動相

　　固定相：硅膠、氧化鋁、高分子多孔微

　　流動相：烷烴加極性調(diào)節(jié)劑;極性越強(qiáng)，洗脫能力越強(qiáng)

　　四、分配色譜法

　　1.原理：被分離組分溶入互不相溶的固定相與流動相，達(dá)到平衡后濃度之比(分配系數(shù))的差異

　　正相分配色譜：流動相極性小于固定相極性。極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。用于分離極性及中等極性物質(zhì)

　　反相分配色譜：流動相極性大于固定相極性。極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。應(yīng)用廣泛，用于分離非極性至中等極性物質(zhì)

　　離子對反相色譜：在流動相中加入有機(jī)離子對試劑，用于有機(jī)酸、堿、鹽的分離

　　離子抑制色譜：調(diào)整流動相pH，抑制組分的解離

　　2.常用固定相和流動相

　　(1)固定相：化學(xué)鍵合相

　　非極性：十八烷基硅烷鍵合硅膠

　　極性：氨基和氰基硅烷鍵合相

　　(2)流動相

　　正相色譜：烷烴加極性調(diào)節(jié)劑

　　反相色譜：甲醇-水、乙腈-水

　　五、色譜系統(tǒng)適用性試驗

　　固定相種類、流動相組成、檢測器類型不得改變，其余可適當(dāng)改變以達(dá)到色譜系統(tǒng)適用性試驗要求

　　1.理論塔板數(shù)：不得低于各品種項下規(guī)定的最小理論塔板數(shù)

　　2.分離度：除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5

　　3.重復(fù)性：取各品種項下對照品2連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%

　　4.拖尾因子：除另有規(guī)定外，拖尾因子應(yīng)在0.95～1.05之間

　　六、應(yīng)用

　　1.鑒別：利用保留值進(jìn)行鑒別。

　　2.檢查

　　(1) 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中某個雜質(zhì)含量

　　(2) 外標(biāo)法測定供試品中某個雜質(zhì)含量

　　(3) 加校正因子的主成分自身對照法

　　(4) 不加校正因子的主成分自身對照法

　　(5) 面積歸一化法：一般不用于微量雜質(zhì)檢查

　　3.含量測定：外標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)法

　　內(nèi)標(biāo)物要求：①原樣品中不含有的組分;②保留時間與待測組分相近，但能完全分離;③純度合乎要求。

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